酵母細胞基因組rna的提取
酵母細胞基因組RNA的提取一般可以按照以下步驟進行:
1. 提取細胞總RNA:將酵母細胞收集後用三倍體積的Trizol或RNeasy提取試劑按照説明書操作,可將總RNA提取出來。
2. 消化DNA:將總RNA加入DNase消化緩衝液,用DNase I酶消化,將DNA降解掉。
3. 純化RNA:將消化完DNA的RNA取出後,加入等體積的Phenol/Chloroform提取試劑,混勻後轉到離心管內離心10min,配合氯仿/異戊醇萃取後得到RNA。
4. 定量RNA濃度:用分光光度計測定RNA的吸光度(OD260)和純度(OD260/OD280),算出RNA的濃度。
5. 模板製備:根據實驗需要和RNA的有效性,可選擇使用不同的方法進行DNA和cDNA的合成。常用的方法有RT-PCR和Real-time PCR。
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