如何利用熒光顯微鏡檢測細胞凋亡 實驗步驟有哪些

1、收集約106細胞，用冷PBS洗2次。

2、4%福爾馬林4℃固定10min左右後塗片，晾乾。

3、以5-10μg/mL hocchst 33258染色5-10min，水衝淨，晾乾後觀察，以紫外光（340nm）激發hocchest。

4、細胞凋亡是指爲維持內環境穩定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它並不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是爲更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。

5、細胞凋亡有別於細胞壞死，它有一系列的細胞形態學和生物化學的改變，包括出現染色體濃縮、DNA降解、凋亡小體的形成等。在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine,PS）位於細胞膜內側，但在凋亡細胞中，PS從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中，Annexin-V（膜聯蛋白-V）是一種分子量爲35-36KD的Ca2+的依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力結合。因此將Annexin-V進行熒光素（如FITC 、PE）或生物素（biotin）標記，以標記了的膜聯蛋白-V作爲探針，利用熒光顯微鏡檢測細胞凋亡的發生。