爲什麼要構建表達載體? 這兩點是主要原因
1、得到大量的DNA,雖然PCR也可以,但PCR擴增有出錯率、但你每做一次常規的PCR,而且每次都要重新提DNA和RNA才行,而且,PCR反應的試劑盒又不便宜,用PCR來製備大量DNA有點得不償失。儘管構建克隆載體也存在操作複雜(相對於PCR),成功率不是極高,而且還要篩選,但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌,你就可以保存了,你想什麼時候用,搖個菌,就可以製備到大量的DNA。
2、測序需要。你想轉表達,你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的,不要以爲你設計了個特異性引物,然後跟你mark的長度就可以確定了,這也只是推測,在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許,要拿去測序,而一般送測的序列都是構建到載體上的序列,克隆載體上一般也都帶有測序引物,已確定這就是你要的那條序列。你要寫論文必須要給人真憑實據。
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